該模型通過長期觀察普通狼瘡小鼠模型，待其到40周齡時，檢測其dsDNA等，結(jié)合皮膚癥狀變化，來確定慢性狼瘡皮膚病模型的建立。目前國際上尚欠缺類似模型，為研究狼瘡皮膚病發(fā)病機制提供了工具。

模型動物飼養(yǎng)在武漢大學(xué)人民醫(yī)院動物房SPF級動物實驗室，實驗動物使用許可證SYXK（鄂）2015-0027。

（1）建筑特點

門采用專用凈化密閉門并配備觀察窗。單向走道呈順時針走向設(shè)計。屏障系統(tǒng)內(nèi)共有大鼠飼養(yǎng)室1間，小鼠飼養(yǎng)室3間，隔離觀察室1間，實驗準(zhǔn)備室1間，潔物存放室1間，清洗消毒室1間。此外，屏障系統(tǒng)外配有監(jiān)控室、機房和配電室等。

（2）設(shè)計參數(shù)

室內(nèi)溫度：20～26°C；日溫差：≤4°C；相對濕度：40%～70%；換氣次數(shù)：15～20次/h；氣流速度：≤0．2m/s；壓強梯度：20～50Pa；空氣潔凈度：7級；菌落數(shù)：≤3個/皿；氨濃度：≤14mg/m3；噪聲：≤60dB；Z低工作照度：≥200lx；動物照度：15～20lx；晝夜明暗交替時間：12/12h。

（3）通風(fēng)和空調(diào)系統(tǒng)

動物實驗室采用全新風(fēng)中央空調(diào)通風(fēng)系統(tǒng)。空氣經(jīng)過初、中、三級過濾器后進入實驗室內(nèi)環(huán)境。

（4）照明系統(tǒng)

一更、淋浴、二更、氣閘、清潔走道、潔物存放處、污物走道、緩沖間和清洗消毒間、動物飼養(yǎng)室、實驗準(zhǔn)備間、隔離觀察室和功能實驗室等安裝有手動和自動開關(guān)，根據(jù)實際需要，調(diào)節(jié)控制室內(nèi)照明燈。未啟用房間、清潔走道、潔物存放處、污物走道等在每日中午12點和晚上8點開啟紫外線燈照射1h。

（5）通訊系統(tǒng)

因為SPF級動物實驗室的環(huán)境和設(shè)施具有特殊要求，人員進入后不能隨意出入，而室內(nèi)外的聯(lián)系又十分重要，故室內(nèi)各房間均安裝內(nèi)部電話機，按照房間順序編排電話號碼，各室內(nèi)電話可相互連通，并均與監(jiān)控室總機保持聯(lián)系，保證實驗室內(nèi)外信息的及時溝通。

（6）監(jiān)控系統(tǒng)

對SPF級動物實驗室的出入口、走道、實驗動物飼養(yǎng)室、功能操作室等重要位置均安裝了可作270°旋轉(zhuǎn)的攝像機，能夠及時了解設(shè)施的運行狀態(tài)；也能有效督促實驗人員執(zhí)行科學(xué)的操作規(guī)程，避免人為因素造成室內(nèi)環(huán)境和設(shè)施的污染；并對整個實驗期間的動物狀態(tài)和反應(yīng)進行觀察，減少對動物的滋擾。

（7）供水系統(tǒng)

SPF級實驗動物飲用水以純凈水為宜。本實驗室采用管道供水，將處理后的純凈水用塑膠管道輸送到屏障系統(tǒng)內(nèi)實驗準(zhǔn)備室，設(shè)置接水槽，為實驗動物供應(yīng)滅菌的飲用水和屏障系統(tǒng)內(nèi)用水。要經(jīng)常更換和清洗輸水管道，清洗籠具的用水添加適當(dāng)比例的84消毒液。

（8）供電系統(tǒng)、警報系統(tǒng)和消防設(shè)施

SPF級動物實驗室要求全天候不間斷供風(fēng)和供電，如果出現(xiàn)故障，不能及時發(fā)現(xiàn)和處理，就可能導(dǎo)致環(huán)境設(shè)施的污染、動物感染或死亡，造成嚴(yán)重后果。因此應(yīng)對SPF級動物實驗室使用獨立穩(wěn)定的供電系統(tǒng)，并配備有應(yīng)急電源。在中央空調(diào)機房控制室安裝風(fēng)機故障警報系統(tǒng)，以便及時檢修和維護，保證設(shè)施的安全運行。

（9）消毒滅菌設(shè)備

為防止外界物品進入SPF級動物實驗室時所攜帶的細菌污染室內(nèi)環(huán)境和造成動物交叉感染，按照不同物品的特性，進行紫外線照射消毒、渡槽消毒液消毒或?qū)Ｓ玫臋C動門真空滅菌器消毒。

（10）動物飼養(yǎng)籠具

飼養(yǎng)大、小鼠的籠具聚碳酸脂材料的塑膠籠具，具有高透明、耐高壓、耐高溫、耐酸堿等特點。通用的不銹鋼籠具長、寬、高分別為40、30、20cm，適用于單籠飼養(yǎng)有特殊要求的實驗動物，配有底盤和食槽，確保實驗動物有充足的采食和活動空間，同時也保證室內(nèi)環(huán)境的清潔。

（11）墊料的選擇和使用

在使用塑膠墊料時，墊料是大小鼠直接接觸的鋪墊物，起到吸濕、保暖和造窩的作用。墊料的好壞直接影響到大小鼠術(shù)后的恢復(fù)、生長發(fā)育和繁殖性能。目前，所使用的墊料主要有玉米秸墊料、刨花墊料。

（12）飼料配制

大小鼠的生產(chǎn)型飼料和維持型飼料必須嚴(yán)格按照國家標(biāo)準(zhǔn)，進行科學(xué)配制生產(chǎn)。每半年檢測一次飼料的微生物指標(biāo)和有效營養(yǎng)成分指標(biāo)，保證飼料的質(zhì)量。

（1）維甲酸干預(yù)可造成大鼠胚胎整體及第一二鰓弓衍生組織的發(fā)育不良。顱面部發(fā)育異常表現(xiàn)為頭顱外形圓鈍，耳殼較正常縮小，位置向下及向背側(cè)移位，部分胚胎出現(xiàn)無耳畸形，與第一二鰓弓綜合征患者顱面部癥狀相似。

（2）維甲酸干預(yù)對神經(jīng)嵴來源軟骨細胞的影響

第一二鰓弓組織形成面部的大部分骨性及軟骨結(jié)構(gòu)，其過程為構(gòu)成第一二鰓弓的神經(jīng)嵴細胞分化成軟骨細胞并通過軟骨化骨的過程形成面部的大部分骨性組織。前期工作中我們利用致畸物維甲酸處理神經(jīng)嵴來源軟骨細胞，發(fā)現(xiàn)維甲酸可抑制細胞的增殖及相關(guān)軟骨標(biāo)志性基因的表達，從而可能導(dǎo)致相關(guān)軟骨及軟骨來源顱面結(jié)構(gòu)發(fā)育不良。利用基因芯片技術(shù)篩選出了維甲酸作用后表達改變1.5倍以上的基因，通過生物信息學(xué)分析確定多種通路參與了維甲酸導(dǎo)致的先天性顱面畸形的發(fā)生。

（3）本研究證實了皮下注射維甲酸的有效性及安全性

維甲酸對皮膚及全身均有一定的毒性，但如圖5所示，皮下注射維甲酸對注射部位皮膚無明顯影響，顯示了皮下注射維甲酸的局部安全性。

1.Wistar大鼠飼養(yǎng)及合籠：大鼠顆粒飼料喂養(yǎng)，自由飲水，于晚8點將Wistar大鼠按雌雄比2:1合籠，于次日早8點檢查雌鼠陰道，發(fā)現(xiàn)陰栓定為孕0天（G0）。當(dāng)天中午定位孕0.5天（G0.5）。觀察孕鼠一般生長情況，看皮毛是否光滑，精神狀態(tài)是否良好，有無流產(chǎn)現(xiàn)象，隨機分籠飼養(yǎng)。

2.皮下注射維甲酸, 利用維甲酸干預(yù)大鼠胚胎，對不同給藥時間、給藥劑量的相關(guān)胚胎發(fā)育整體指標(biāo)及顱面部發(fā)育指標(biāo)進行測量及統(tǒng)計。發(fā)現(xiàn)G10天干預(yù)對胚胎整體發(fā)育影響較小，但對顱面部發(fā)育影響較大，因此更接近于第一二鰓弓綜合征病人整體及顱面部表現(xiàn)。鼻枕距及頂距是顱面部發(fā)育的兩個重要指標(biāo)，皮下注射維甲酸40㎎/㎏即造成了兩個指標(biāo)的明顯減小，同時出現(xiàn)頭顱外形圓鈍。

第一、二鰓弓綜合征是面部常見先天畸形，新生兒發(fā)生率為1/5000-1/4000，多為單側(cè)。病因目前還不完全明確，主要為環(huán)境和遺傳因素是目前小耳畸形病因研究的重點。臨床表現(xiàn)：耳部輕度畸形或下移，重度則僅存耳部皮贅、外耳完全缺損、外耳道閉鎖、中耳聽骨發(fā)育不全，聽力障礙或傳導(dǎo)性耳聾。下頜骨畸形輕度表現(xiàn)為下頜骨升支及髁狀突短小，關(guān)節(jié)窩變淺，重者整個升支消失，下頜骨體發(fā)育不全，患者面部短小等。

維甲酸是維生素A的衍生物，其生物活性是由一系列受體介導(dǎo)，主要為維甲酸受體（RAR）和維甲酸X受體（RXR）。維甲酸在胚胎發(fā)育中發(fā)揮重要作用，如正常的維甲酸信號對于神經(jīng)嵴組織的形成和正常發(fā)育是必須額，對神經(jīng)嵴發(fā)育中的重要基因也起調(diào)節(jié)作用，其中包括Hox基因，參與神經(jīng)嵴組織發(fā)育的Wnt、成纖維細胞生長因子等通路也受維甲酸調(diào)節(jié)，維甲酸還參與了胚胎發(fā)育中體軸的建立。眾多臨床報道及基礎(chǔ)研究均顯示維甲酸可導(dǎo)致多種胚胎畸形，其中即包括先天性小耳畸形。據(jù)統(tǒng)計孕期接觸維甲酸導(dǎo)致畸形的發(fā)生率顯著高于未接觸者。