皮膚生理學檢測（Cutaneous Biological Test，CBT）是一種皮膚精細生理目的檢測體系，即采用皮膚膠帶粘貼（Tape Stripping）的方法采樣，經過顯微鏡觀察、成分剖析、免疫學檢測、多組學技術，從皮膚表觀生理學到組織、細胞再到蛋白、基因水平對膠帶上采集的皮膚樣本停止多角度、多層面的原位測定，依據相應皮膚生理學目的的變化，深化開掘肌膚效果的成因和機制，為迷信研討皮膚以及化裝品的成效評價提供集體化、精準和片面的人體皮膚大數據支持。

一、角質層檢測

角質層是表皮的*外層，由5-15層細胞核和細胞器消逝的角質細胞及細胞間脂質構成。20世紀70年代，Peter Elias教授籠統的將角質層的結構稱之為“磚墻結構”。

圖1 角質層磚墻結構

角質層采樣是用涂有黏性資料的膠帶、圓盤或許玻片粘貼皮膚，作用于表皮角質層的黏附力可使鱗屑零落，從而觀察角質層的生理和病理學變化。可經過觀察角質鱗屑和角質細胞的形狀來剖析皮膚的枯燥或受損狀況。

二、脂質檢測

角質層細胞間脂質由大約50%神經酰胺、25%膽固醇、15%游離脂肪酸和一些主要的脂質組成。研討證明，皮膚脂質的分泌進程及主要組成成分如甘油三酯、角鯊烯、神經酰胺、膽固醇、游離脂肪酸等的結構、含量或比例的變化，都會影響皮膚屏障功用。

目前提取皮膚外表脂質*常用的方法是脂帶法，比擬常用的膠帶是Corneofix?。將膠帶采集的脂質溶解于一定比例的環己烷/乙醇溶液中，脂質提取物在氮氣條件下枯燥，經過自動化高能色譜剖析儀和氣相色譜儀定量剖析角質層脂質的詳細成分。可經過火析各脂質成分的比例來研討皮膚屏障受損或恢復狀況。

三、微生物檢測

皮膚外表棲居著眾多微生物，包括細菌、真菌、病毒、衣原體和某些原蟲等，這些共同構成了皮膚的微生物群（分為常駐菌群與暫住菌群），外部環境、皮膚微生物群以及宿主皮膚構成了皮膚微生態。

常駐菌群是指臨時定居在皮膚，并且可以自我恢復的菌群，菌群數量和種類因集體、環境的不同而不同，它們屬于人類的共生體，可以協助皮膚抵抗外界撫慰，是皮膚菌群的主要成員，常駐菌一旦脫離特定的環境，就會形成皮膚疾病。常駐細菌主要有葡萄球菌、微球菌、丙酸桿菌、棒狀桿菌、不動桿菌，常駐真菌有念珠菌、球擬酵母菌、表皮癬菌、小孢子菌、毛癬菌等。

暫駐菌是指經過接觸外界環境而取得的一類微生物，包括金黃色葡萄球菌、溶血鏈球菌及腸球菌等，它們是惹起皮膚感染的主要病原菌。

確定皮膚中存在何種細菌的傳統方法是運用拭子取樣。采樣技術的關鍵：運用濕潤的棉簽，施加動搖的壓力，以及摩擦的分歧性（在采樣區域30 s內來回擦拭50次）。經過研討皮膚外表菌群的變化，可以了解微生物與皮膚效果的關系，并針對性治療。例如痤瘡丙酸桿菌可將甘油三酯水解為游離脂肪酸，這些游離脂肪酸被氧化構成過氧化脂質激活角質構成細胞的脂氧合酶，使IL-6等炎癥因子分泌添加，促發并減輕炎癥反響。

四、功用組檢測

在對功用組皮膚目的停止檢測時大多運用D-Squame?粘貼盤停止采樣，采樣后對膠帶直接停止染色，經過圖像剖析停止物質定量，或采用高效液相色譜法檢測膠帶上相應物質的含量。功用組皮膚目的：丙二醛、維生素E、自然保濕因子、黑素細胞等。

D-Squame

參考資料：

[1] 馬雪. 化裝品成效評價（Ⅻ）-皮膚生理學檢測在化裝品成效評價中的運用. 日用化學工業. 2020.

[2] 董銀卯. 皮膚表觀生理學. 化學工業出版社.

[3] 崔樂. 維持皮膚屏障研討停頓—脂質的分泌及組成. 中國皮膚性病學雜志. 2016.

[4] 王茜. 皮膚微生態與化裝品研發. 日用化學工業. 2017.

敏理性皮膚（Sensitive Skin，SS）特指皮膚在生理或病理條件下發作的一種高反響形狀，主要發作于面部，臨床表現為遭到物理、化學、肉體等要素撫慰時皮膚易出現灼熱、刺痛、瘙癢及緊繃感等客觀癥狀，伴或不伴紅斑、鱗屑、毛細血管擴張等客觀體征。

一、體外實驗

1、透明質酸酶抑制實驗

透明質酸酶（HAase）是透明質酸（HA）的特異性裂解酶，抑制HAase的活性可保證HA含量和功用正常。透明質酸酶抑制實驗是*典型的抗敏活性評價體外方法，以透明質酸酶抑制率為目的評價物質的抗過敏活性，透明質酸酶抑制率越大則抗過敏活性越強。

2、自在基肅清實驗

線粒體在電子傳遞的進程中發生的自在基會攻擊細胞膜、蛋白質甚至DNA，招致細胞的衰老甚至死亡，抑制自在基活性可以有效緩解由外界撫慰發生的過量自在基所招致的細胞結構功用退步，進而維護皮膚的正常屏障結構。自在基包括：DPPH·、羥基自在基（·OH）、超氧陰離子自在基、一氧化氮自在基（NO·）等。

3、紅細胞溶血實驗

紅細胞溶血實驗（RBC hemolysis test system）由歐洲替代方法驗證中心（ECVAM）樹立，*后用于替代Draize兔眼實驗對化合物眼撫慰性的標識、篩查或機制研討，其原理在于測定從紅細胞中漏出的血紅蛋白的量來評價細胞膜的損傷水平，血紅蛋白漏出量越多，損傷越大。

此外，還可以經過研討神經酰胺、AQP-3（水通道蛋白-3）、FLG（絲聚蛋白）、Caspase-14（半胱氨酸天冬氨酸特異性蛋白酶-14）、炎癥因子等的表達來評價抗敏成效。

二、植物實驗

除斑貼實驗以外，多為抑制炎癥乃至過敏反響，這方面的研討不只限于皮膚，而且深化到外部器官和機體免疫系統。

1、豚鼠皮膚瘙癢模型止癢實驗

2、豚鼠皮膚脫水模型的皮膚修復實驗

3、主動皮膚過敏模型抗敏實驗

2002年11月7日歐洲議會與歐盟理事會在布魯塞爾達成協議，決議“從2009年起在歐盟范圍內制止運用植物停止化裝品毒性和過敏性實驗，2013年制止運用植物停止化裝品原料的平安性評價；逐漸不允許其成員國從本國出口和銷售進舉植物實驗的化裝品。”

三、人體實驗

大局部抗敏成效化裝品原料及產品的開發環節中，人體實驗依然是必不可少的一局部，普通為激起斑貼實驗。此外人體實驗中還可以停止角質層水分含量實驗、皮膚紅斑指數測試、皮膚其他生理指數測試以及皮膚厚度、皮膚外表結構的改動，從而判別皮膚的敏理性狀況。

1、客觀評價

包括視覺評價（專家或醫生評價）和受試者自我評價（調查詢卷）。

2、半客觀評價

罕見的有乳酸刺痛實驗和辣椒素實驗等。

乳酸刺痛實驗：在室溫下，將5％或10％的乳酸水溶液50μL涂抹于鼻唇溝及恣意一正面頰，區分在0，2.5，5和8 min時訊問受試者的自覺癥狀，按4分法停止評分（0分為沒有刺痛感，1分為輕度刺痛，2分為中度刺痛，3分為重度刺痛）。然后將兩次分數相加，總分≥3分者為乳酸刺痛反響陽性。

辣椒素實驗：將直徑為0.8 cm的兩層濾紙放置于一側鼻唇溝外約1 cm處及恣意一正面頰，將含量為0.1％的辣椒素50μL置于濾紙上，訊問受試者的覺得（1分為勉強可以發覺，2分輕度可以發覺，3分為中度可以發覺，4分為重度可以發覺，5分為疼痛）。假設受試者的灼痛覺得繼續時間>30 s，且水平≥3分者為陽性。

SLS皮膚撫慰實驗：將一定濃度的SLS置于斑試器內，局部封包于受試部位，24 h后去除斑試器并于去除斑試器后特定時間觀察受試部位皮膚變化，停止I臨床評分及無創儀器檢測。

3、客觀評價

客觀評價法是經過儀器對受試者運用化裝品前后的皮膚形狀參數停止采集、樣本剖析和統計剖析，進而對化裝品停止成效評價的一種方法。

經皮水分流失（TEWL）、皮膚厚度和密度、水分含量、油脂分泌量、酸堿度（pH值）、紅斑指數（Erythema index，EI）、色素指數（Melanin index，MI）及彈性（R2／R5／R7）等基礎生理目的，可以在一定水平上將其屏障功用停止量化表征。

END

參考資料：

[1] 樊琳娜. 敏感皮膚成因解析及化裝品抗敏活性評價停頓. 日用化學工業. 2015.

[2] 王歡. 化裝品成效評價(V)-舒緩成效宣稱的迷信支持. 日用化學工業. 2018.

[3] 董銀卯. 化裝品配方設計7步. 化學工業出版社.

化裝品成效評價項目

項目背景：以后我國化裝品產業飛速開展,化裝品品牌百花齊放，化裝品技術質量逐漸提高。與此同時化裝品監管法規不時完善，化裝品消費者需求日益提升，化裝品平安效果亟需品牌廠家注重。

項目運用

1、 法規要求

化裝品監視管理條例（2021.01.01）

化裝品注冊人，備案人對化裝品的質量平安和成效宣稱擔任。

2、 成效定量剖析

3、 原料開發

4、 配方挑選

5、 銷售支持

6、 學術運用

項目列表

出口及國產化裝品備案專業效勞和優勢

? 一站式效勞——專業、高效、省時、省心。

? 專業團隊——高素質專業技術隊伍，熟懂法規、研發、質控等各個環節，滿足企業的各種需求。

? 專屬客服——專屬客服為客戶處置，央求、受理，進度跟蹤，任務協調報揭發放以及財務結算等進程中的各種效果，協助客戶浪費時間和本錢。

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